本文对文献报道的由9个CpG位点构成的复合扩增体系进行有效性验证,探究该体系在中国人群中的适用性.选取唾液、精液、血液、阴道分泌液、月经血五种体液共236个样本,使用SNaPshot复合扩增体系检测9个CpG位点的甲基化值,位点判定阈值设为甲基化值大于0.1.使用重亚硫酸氢盐转化后DNA(模板量范围为0.5~10 ng)对该体系进行分析.选取唾液、精液、血液、阴道分泌液四种体液DNA,两两分别按照1∶1、1∶5、1∶10、1∶20的比例混合后进行检测.最后,利用五种体液共计232份样本实验数据集进行模型的构建与测试,其中训练集(n=162)用于构建随机森林模型,测试集(n=70)对体液类型进行预测,检验模型预测效果,同时添加外部数据集(n=40)作为验证集对模型的预测效果进行验证.直接根据特异性峰检出判定,唾液、精液、血液、阴道分泌液和月经血样本鉴定准确率分别为100%、98%、98%、94%和21%.该体系对1~10 ng的重亚硫酸氢盐转化后DNA均可有效检测.在混合样本中,1∶1比例混合的样本均可被正确鉴别;1∶5、1∶10和1∶20混合样本均能检出主要成分,次要成分检出存在较大差异.利用232份样本构建随机森林模型,测试集与验证集中的五种体液来源鉴定准确性均为100%.综上,该复合扩增体系具有良好的法医学应用价值.
DNA甲基化 复合扩增体系 SNaPshot 体液组织来源鉴定
DNA methylation multiplex amplification system SNaPshot tissue identification of body fluids