目的 测序深度是二代测序检验的关键参数,与测序结果的准确性紧密相关.法医物证检验对于准确性要求极高,科学合理地设定法医学二代测序检验的测序深度分析阈值至关重要.方法 本研究采用 50 份已知分型样本的二代测序微单倍型靶向测序数据,通过计算各阈值条件下各基因座的准确率、精确率、召回率和F1 分数,细致研究了基于固定读段数和基于固定序列占比两类分析阈值设定方法.结果 当设定分析阈值为 50'、100'时,均观察到假阳性;当设定分析阈值为200'时,观察到假阴性;当设定分析阈值为 1.5%、3.0%、4.5%时,均观察到假阳性.本研究进一步提出第三类分析阈值设定方法——基于序列占比散点图,基于该方法的分析结果未观察到假阳性或假阴性情况.通过讨论导致法医学二代测序深度差异显著的四个因素,类比毛细管电泳技术的分析阈值设定方法,讨论了分析阈值高低与混合DNA区分能力的相关性.结论 采用序列占比散点图方法设定分析阈值在法医遗传标记二代测序检验中具有重要应用价值.