本文以肝脏为样本,建立了同时检测生物组织中10种蟾蜍毒素(沙蟾毒精、日蟾蜍它灵、酯蟾毒精、去乙酰华蟾蜍精、酯蟾毒配基、华蟾毒它灵、蟾毒它灵、华蟾酥毒基、蟾毒灵、华蟾毒精醇)的超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive MS)的检测方法.取肝脏 0.2 g,首先加入 0.8 mL乙腈沉淀蛋白,然后用Hybird固相柱进行净化,选用ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm×1.8 μm)色谱柱,流动相A相为0.1%甲酸水,B相为乙腈,采用梯度洗脱分离;质谱采用电喷雾离子源,正离子模式进行分析.10 种蟾蜍毒素的检出限均在 10 ng/mL以内,最低可以达到 0.1 ng/mL.10 种蟾蜍毒素添加在 20～400 ng/mL范围内的线性良好(R2＞0.996).10 种蟾蜍毒素的提取回收率在 62.9%～93.2%之间,基质效应在90.9%～109.0%之间,日内精密度在9.2%之内,日间精密度在14.6%之内,在基质中的反复冻融稳定性、常温稳定性和提取后稳定性良好,浓度变化均在15%以内.灌胃解剖后在雄鼠体内的分布为:肝＞肺＞心＞肾＞生殖器＞肌肉,在雌鼠体内的分布为:肺＞生殖器＞肝＞心＞肾＞肌肉.本研究建立了生物组织中蟾蜍毒素的检测方法,并初步得出毒素在动物体内的分布规律,为蟾蜍毒素的检验和相关检材的选择提供了参考依据.