本文建立了人的血液、尿液中10种蟾蜍毒素(沙蟾毒精、日蟾蜍它灵、酯蟾毒精、去乙酰华蟾蜍精、酯蟾毒配基、华蟾毒它灵、蟾毒它灵、华蟾酥毒基、蟾毒灵、华蟾毒精醇)的超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive MS)的检测方法.取血液或尿液0.2 mL,先加入0.8 mL乙腈沉淀蛋白,后用Hybird固相柱进行净化.选用ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm×1.8 μm)色谱柱,流动相A相为 0.1%甲酸水,B相为乙腈,采用梯度洗脱分离.质谱采用电喷雾离子源,正离子模式进行分析.该方法在血液、尿液中对于 10 种蟾蜍毒素的检出限均可在 10 ng/mL以内,最低可以达到 0.1 ng/mL.10 种蟾蜍毒素的血、尿基质添加在 20～400 ng/mL范围内线性良好(R2＞0.995).血、尿中 10 种蟾蜍毒素的提取回收率在65.0%～97.7%之间,基质效应在90.8%～109.0%之间,日内精密度在9.6%之内,日间精密度在14.7%之内,在基质中的反复冻融稳定性、常温稳定性和提取后稳定性良好,浓度的RSD变化均在 15%以内.用本文建立的方法对动物实验中收集到的血液进行分析,结果表明10种蟾蜍毒素均可检出.该方法灵敏度高,适用性广,可以用于蟾蜍毒素中毒类案件的检验鉴定.