建立生物检材样品中 2-氯地西泮及其代谢物的在线固相萃取-液质联用(on-line SPE-LC-MS/MS)同时检测方法.样品用乙腈沉淀蛋白,经离心、稀释、过滤后上样,采用Agilent PLRP-S(15-20 μm,2.1×12.5 mm)在线SPE柱富集纯化,Agilent Poroshell 120 EC-C18(3.0×150 mm,2.7 μm)色谱柱分离,在线SPE柱以 5%甲醇水-乙腈作为流动相,流速 1.0 mL/min梯度洗脱,分析柱以 5 mmol/L醋酸铵缓冲液(含 0.1%甲酸)-乙腈作为流动相,流速 0.4 mL/min梯度洗脱.离子源为电喷雾离子源(ESI),监测方式为多反应监测(MRM).实验优化了色谱条件、质谱条件、在线SPE条件等参数,方法检出限为 1 ng/mL,定量限为 2.5 ng/mL.该方法操作简单方便、样品需求量少、灵敏度高,可用于生物检材中 2-氯地西泮及其代谢物的检测分析.