线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)是法医学检验分析的重点对象之一,在人群遗传结构解析、母系谱系溯源、复杂亲缘关系鉴识以及混合斑去卷积等方面发挥着重要的作用.对于无法获得核DNA图谱的陈旧或严重降解的疑难生物检材,mtDNA因其独特的环状结构和多拷贝特征或成为唯一可检测到的DNA来源.随着DNA测序技术的不断发展和完善,mtDNA分析也从一代测序的控制区发展到二代测序的全基因组,在提高单倍型分辨率的同时也促进了mtDNA的法医学应用实践.近年来,长读长的三代测序技术为mtDNA分析提供了全新的方法学,以非拼接的方式获得mtDNA控制区或全序列,不仅可避免核-线粒体DNA序列的影响,而且进一步提升异质性的识别率.本文将介绍不同测序技术的相关原理,并对mtDNA在法医学个人识别、亲缘关系鉴定、混合斑检测以及生物地理祖先推断等方面的应用及研究进展进行综述,旨在为后期研究及实践提供参考和借鉴.